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2023年３月23日から25日に国立京都国際会館で開催された第22回日本再生医療学会総会 https://site.convention.co.jp/jsrm2023/ において、当社が研究開発を進めているeNK^®細胞及びUDCの研究成果をポスター発表致しました。本ページから、各演題のポスターが閲覧できますのでご活用ください。

<ポスター閲覧>

演題をクリックしてください。

【eNK^🄬細胞】

①演題番号：P-03-1

　三次元自動灌流培養法による遺伝子導入iPS細胞由来NK細胞（HLCN061）の大量製造方法の開発

②演題番号：P-03-3

　高親和型CD16（F176V）を発現するiPSC由来遺伝子導入NK細胞HLCN061の肺がんおよび中皮腫に対する抗腫瘍効果

③演題番号：P-03-4

　Genetic engineering and quality control of clinical grade iPS cells as a source of HLCN061

④演題番号：P-03-5

　iPS細胞由来NK細胞の遺伝子導入による固形がんに対する抗腫瘍機能の強化

⑤演題番号：P-03-6

　iPSC由来遺伝子導入NK細胞HLCN061の体内動態特性と抗腫瘍効果

⑥演題番号：P-03-7

　IFN-γが遺伝子導入iPS細胞由来NK細胞（HLCN061）の抗腫瘍効果に与える影響

【UDC】

演題番号：P-21-3

　Clinical grade genetically engineered hypoimmunogenic human induced pluripotent stem cell line

 

<演題紹介>

演題番号：P-03-1

三次元自動灌流培養法による遺伝子導入iPS細胞由来NK細胞（HLCN061）の大量製造方法の開発

近年がん免疫療法においてNK細胞療法は、高い抗腫瘍性を持ちながら、副作用のリスクが低いことから有望な治療方法として注目を集めている。そのため、iPS細胞を用いたNK細胞製造法も報告され始めている。我々は、固形がんに対する抗腫瘍効果を増強するために遺伝子導入iPS細胞由来NK細胞（HLCN061）を開発している。今回、より安価なOff-the-shelf免疫細胞治療法を目指し、スケールアップ可能な三次元灌流培養法に着目し、従来技術より効率的なiPS細胞由来NK細胞作製技術を確立した。

 

演題番号：P-03-3

高親和型CD16（F176V）を発現するiPSC由来遺伝子導入NK細胞HLCN061の肺がんおよび中皮腫に対する抗腫瘍効果

難治性固形腫瘍の治療を目的として、NKG2D, IL-15, CD16, CCL19, CCR2B遺伝子を導入したiPSC由来NK細胞（HLCN061）を開発している。今回、高親和性CD16を発現するHLCN061の肺がんおよび中皮腫に対する抗腫瘍効果およびADCC活性について報告する。

 

演題番号：P-03-4

Genetic engineering and quality control of clinical grade iPS cells as a source of HLCN061

HLCN061 is a human iPSC derived NK cells differentiated from clinical grade iPSC, in which IL15, CCR2B, CCL19, CD16a, and NKG2D have been introduced using PiggyBac system. After single-cell cloning, an iPSC clone expressing all 5 factors was selected for further application. Frozen Seed-Stock cells of the iPSC clone showed negative in mycoplasma, bacterial and endotoxin tests.

G-banding karyological test with the iPSC Seed-Stock showed normal human karyotype. RAISING method, PCR amplification followed by high-throughput sequencing, unveiled that the PiggyBac donor DNAs have been integrated in the genome at total 13 locations. No deleterious mutation that could increase tumorigenicity risk was found in the iPSC Seed-Stock compared to parental iPSC through WGS analysis followed by SNV/INDEL/CNV calling coupled with RNA-seq expression data. We have concluded that this iPSC Seed-Stock is suitable as a source material of iPSC MCB, followed by iPSC WCB and HLCN061. Additional analyses will be conducted in these iPSC banks as well as HLCN061 to assess tumorigenicity risk of HLCN061.

 

演題番号：P-03-5

iPS細胞由来NK細胞の遺伝子導入による固形がんに対する抗腫瘍機能の強化

がん免疫細胞療法は新規の治療法として注目されており、血液がんで劇的な治療効果が報告されている。しかしながら、固形がんに対しては治療効果を示すには至っていない。我々はこれまでに、ヒトiPS細胞からNK細胞を高効率で誘導でき、かつ大量培養が可能な手法の開発に成功している。そこで本研究では、iPS細胞に遺伝子導入を施すことで、NK細胞の固形がんに対する抗腫瘍作用の強化を試みた。

5つの遺伝子を導入したヒトiPS細胞株を樹立後、分化を誘導することでCD56陽性のNK細胞（eNK細胞:HLCN061）を作製した。iPS細胞に導入した全ての因子はNK細胞においても良好に発現・分泌が維持されていた。今回、これら導入因子についてeNK細胞での機能検証を行った。

eNK細胞に導入した各因子の機能

①IL-15の分泌⇒生存・増殖機能の向上

②CCR2B発現⇒がん細胞への遊走能力の向上

③CCL19の分泌⇒免疫細胞のリクルート機能

④NKG2D発現⇒がん細胞の認識能力の向上

⑤CD16発現⇒抗体依存性細胞傷害活性の向上

 

演題番号：P-03-6

iPSC由来遺伝子導入NK細胞HLCN061の体内動態特性と抗腫瘍効果

現在、我々は難治性固形腫瘍の治療を目的として、NKG2D, IL-15, CD16, CCL19, CCR2B遺伝子を導入したiPSC由来NK細胞（HLCN061）を開発している。今回、HLCN061の体内動態特性と抗腫瘍効果について検討した。

 

演題番号：P-03-7

IFN-γが遺伝子導入iPS細胞由来NK細胞（HLCN061）の抗腫瘍効果に与える影響

HLCN061は、固形がんに対する抗腫瘍効果を増強するためにCD16, NKG2D, IL-15, CCL19, CCR2遺伝子を導入したヒトiPS細胞由来NK細胞である。IFN-γが、がん微小環境における免疫細胞の抗腫瘍効果に対して、正にも負にも影響を及ぼすことが示唆されている。そこで、IFN-γがHLCN061の抗腫瘍効果に与える影響を調べた。IFN-γを処理したA549に対して末梢血NK細胞は細胞傷害活性が低下するのに対し、HLCN061は増加した。IFN-γ処理によりA549のHLA-Eの発現が増加したことから、その抑制性NK受容体であるNKG2Aを発現していないHLCN061はHLA-Eによる抑制を受けなかったことが考えられた。また、HLCN061はPBMCに対して末梢血NK細胞と同様に細胞傷害活性が低いことから、がん細胞特異的に抗腫瘍効果を発揮することが明らかになった。さらに、IFN-γ処理したA549では、ICAM-1の発現が上昇しており、HLCN061の傷害活性の増加が抗ICAM-1抗体で抑制されたことから、IFN-γにより発現が増加したICAM-1を介して、HLCN061のイムノシナプスの形成が増強されたことが考えられた。以上のことから、HLCN061は末梢血NK細胞が抑制を受けるがん微小環境においても、強い抗腫瘍効果を発揮することが期待される。

 

演題番号：P-21-3

Clinical grade genetically engineered hypoimmunogenic human induced pluripotent stem cell line

We have generated universal donor cells(UDC),ani PSC clone in which HLA-A, HLA-B, HLA-C and RFXANK have been knocked-out, while HLA-G, PD-L1, PD-L2 and　iCasp9　have　been　ectopically expressed. After single-cell cloning, and iPSC clone having biallelic frame shift mutation at the 4 gene loci as well as expressing all the 4 factors was selected for further application. RAIS (Rapid Amplification of Integration Sites) method unveiled that donor DNAs have been integrated in the genome at total 32 locations. T cell response against the UDC-derived cells was diminished. Furthermore, the UDC showed no vulnerability against NK cell cytotoxicity. Master Cell Bank (MCB) of the UDC iPSC clone showed negative in mycoplasma, bacterial and endotoxin tests. G-banding karyological test with the MCB showed normal human karyotype. No deleterious mutation that could increase tumorigenicity risk was found in the MCB compared to parental iPSC by Cancer Panel Amplicon-seqdata. Our UDC could beused for a future starting material of regenerative therapy.